ג'קוב מעלה את הטמפ' ומחזיר אותה למצב הקודם – נראה כי החיידק כבר לא מחוסן בפני פאג'ים אחרים. האם עבר ?curing התשובה היא לא, שכן לאחר הדבקה בפאג' WT מתקבלים רקומביננטים בעלי פנוטיפ
.cIts משמעות הדבר היא שהגנום הפאג'י נותר בכרומוזום החיידק, אך הפסיק לבטא את .cI
השערה:
ישנה בקרה שלילית על התבטאות הרפרסור.
אכן מזוהה הגן האחראי לבקרה זו, ומכונה בשם הקליט cro = things other and repressor of .control
Cro מתברר כנקשר לדנ"א, עובד כדימר ולא קואופרטיבי. אתרי הקישור של cro מתברר, הם אותם
אופרטורים אליהם נקשר !cI ההבדל הוא באפיניות, אשר היא הפוכה עבור .cro
כעת נקודת ההחלטה – תלויה בריכוזו של :cII אם ריכוזו גבוה, ישועתק די ;cI אם ריכוזו נמוך (פעילות
)FtsH ישועתק cI בקצב נמוך.
cII נמוך >- cI נמוך >- cro משתלט על האופרטורים >- מופסק שעתוק של cII ושארית cII בציטופלסמה
מפורקת >- מפסיק שעתוק cI לחלוטין.
לכאורה קישור cro לאופרטורים גם מונע שעתוק של גנים מהמסלול הליטי, אך בסוף תהליך אלו גל השעתוק
השני הושלם, הצטבר מספיק Q ולכן ניתן להמשיך לגל השעתוק השלישי ולמסלול הליטי.
cII גבוה >- מאוקטב ביטוי של ,cI של aQ ושל int >- cI משתלט על האופרטורים >- cII כעת לא משועתק
יותר וריכוזו נעלם לגמרי, אך ישנו עדיין שעתוק של cI מPRM- >- מצב ליזוגני!
מעולה, הבנו את רוב הדברים ורוב השתלשלות האירועים, מלבד דבר אחד:
מדוע cro נקשר לO3- ראשון? האם יש לכך משמעות תפקודית?
שאלה זו סקרנה חוקרים רבות, ונפתרה לפני כ10- שנים: הבעיה הייתה אפשרויות הבדיקה – לא ניתן לבצע חסר לcro- ולראות מה קורה כי cro מעורב בדברים
נוספים.
לא ניתן היה להסיר את המקטע OR3 שכן אז זה גם ישפיע על קישור הרפרסור אליו.
רק לאחרונה הצליחו להגיע ליצירת הפתרון – אופרטור OR3 אשר קושר את הרפרסור, אך לא קושר את .cro
בדיקות שונות נוסו כדי לראות כיצד משפיעה מוטציה זו, והתוצאות מסוכמות בטבלה הבאה:
ניתן לראות שבוצעה השוואה במס' פרמטרים אל מול ה.WT- פגיעה בקישור cro הראתה שהמסלול הליטי רק נפגע
במעט ולא באופן משמעותי (שורה עליונה,
ירידה של רק )25%
הירידה המשמעותית מגיעה לאחר הקרנה בUV בעוצמה נמוכה – ניתן לראות
שבמוטנט האינדוקציה קטנה פי !8
משמעות הדבר מכך שחשיבות קשירות cro לאופרטור נחוצה על מנת למנוע שימור
מצב ליזוגני לאחר אינדוקציה.
טבלה מסכמת – חלקי מנגנון פאג' למבדא:
| תפקיד | מה הוא? | שם הרכיב |
| ממנו מתחיל גל השעתוק הראשון, לאחריו מגיעים הגנים ,cro cII ו.Q- | פרומוטור על גנום
הפאג' |
PR |
| ממנו מתחיל גל השעתוק הראשון (לכיוון השני מ,)PR- לאחריו מגיעים | פרומוטור על גנום | PL |
| .cIII-ו int ,N | הפאג' | |
| מפסיקים את גל השעתוק הראשון אחרי בערך 200 בסיסים ממיקום | טרמינטורים על גנום | TR1/TL1 |
| הפרומוטורים | הפאג,' המתאימים | |
| לפרומוטורים לעיל | ||
| נקשר לmRNA- של הפאג' באתר nut הנמצא בסמוך לטרמינטורים | חלבון המשועתק מגנום | N |
| (בשני הכיוונים.) כאשר נוצר מספיק ממנו, הוא מאפשר המשך שעתוק | הפאג,' אנטי-טרמינטור | |
| מעבר לטרמינטורים. | ||
| משועתק בגל השעתוק הראשון מ,PR- מהווה רפרסור לcI- בכך | חלבון המקודד מגנום | cro |
| שנקשר גם הוא ל.OR- קשירה לOR3- – ראשונה, מעכב ביטוי מ,PRM- | הפאג,' רפרסור | |
| מאפשר את היציאה מהמסלול הליזוגני בעת אינדוקציה; קשירה לOR1- | ||
| לא תאפשר שעתוק מPR- – בשלב זה הפאג' יכנס למסלול הליטי. | ||
| מפרקת את ,N מהווה חיישן למצב הפיזיולוגי של החיידק. | פרוטאזה חיידקית | Lon |
| הגן האחרון במסלול הימני, אנטי טרמינטור אשר מאפשר שעתוק | חלבון המשועתק מגנום | Q |
| מהפרומוטור PR’ ובכך כניסה למסלול הליטי המחייב. | הפאג,' אנטי טרמינטור | |
| פרומוטור הנמצא ממש לפני השלב הליטי המחייב | פרומוטור על גנום
הפאג' |
PR’ |
| פרומוטור אשר ממנו משועתק ,cI מאוקטב על ידי קישור של .cII | פרומוטור על גנום | PRE |
| הפאג,' סמוך לPR אך | ||
| על הגדיל המשלים | ||
| )E=establishment( | ||
| הרפרסור למסלול הליטי, נקשר לאופרטורים המקדימים את | חלבון המקודד מגנום | cI |
| הפרומוטורים בשני המסלולים, מוטציה בו תראה פלאקים צלולים. | הפאג,' רפרסור | |
| משועתק בגל השעתוק השני, מעודד שעתוק של הרפרסור cI על ידי | חלבון המקודד מגנום | cII |
| אקטיבציה מהפרומוטור ,PRE מעודד שעתוק מPaQ- וכן מ.PI- מוטציה | הפאג,' בקר חיובי | |
| בו תראה פלאקים צלולים. | ||
| RNA Antisense – כלומר רנ"א משלים לרנ"א המתורגם לQ- ולכן
נקשר אליו ומונע את פעולתו ומעכב את הביטוי של .Q |
מקטע על הDNA של
הפאג' המשועתק ל- RNA |
PaQ |
| פרומוטור לפני הגן int | פרומוטור על גנום
הפאג' |
PI |
| מתורגם לאינטגראז אשר אחראי לאיחוי הגנום הפאג'י עם החיידקי | גן ממנו מקודדים | Int |
| ובכך לבסס את המסלול הליזוגני. | חלבונים בגנום הפאג' | |
| מפרקת את cII | פרוטאזה חיידקית | FtsH |
| מהווה מעכב תחרותי של FtsH ובכך מקטין את כמות הcII- שעובר | חלבון המקודד מגנום | cIII |
| פירוק. מוטציה בו תראה פלאקים צלולים. | הפאג' | |
| אליו נקשר הרפרסור ובכך מעכב שעתוק מ;PR- קשירה לOR1 תעצור | אופרטור הנמצא לפני | OR (1,2,3) |
| שעתוק מPR- , קישור לOR2 תעודד שעתוק מ,PRM- קישור לOR3 | ,PR מחולק ל3- חלקים | |
| תעצור שעתוק מ.PRM- | ||
| אליו נקשר הרפרסור ובכך מעכב שעתוק מPL- | אופרטור הנמצא לפני
,PL מחולק ל3- חלקים |
OL (1,2,3) |
| פרומוטור חלופי לשעתוק הרפרסור, נמצא מעט אחרי ,PRE משופעל | פרומוטור על גנום | PRM |
| רק לאחר קשירת הרפרסור ל.OR2- | הפאג,' סמוך לPRE- | |
| )M=maintenance( | ||
| יושב על גנים הקשורים לעקת UV ומונע ביטוי שלהם; בעת עקה, | רפרסור חיידקי, | LexA |
| מפרק את עצמו עקב סיגנל של RecA LexA( אינו משתתף במנגנון | הומולוג לcI- | |
| הפאג,' אלא הוא רק בא להסביר שהרפרסור cI עובד באותו מנגנון) | ||
| בעת עקת UV נקשר לדנ"א חד גדילי ובכך משפעל את מנגנון החיתוך
העצמי של LexA וכן של הרפרסור. |
חלבון חיידקי | RecA |
